استخراج و کلون سازی ژن اینترلوکین-۲ جوجه پرورشی ایران

سابقه و هدف: در سال های اخیر سیتوکین های ایمنی مانند اینترلوکین-2 جوجه (chil-2)، همراه با رژیم های واکسیناسیونی در صنعت ماکیان مورد استفاده قرار گرفته است. این سیتوکین ها می توانند به واسطه تکثیر لمفوسیت های t، توسعه لمفوسیت های b و فعال سازی سلول های کشنده ایمنی (nk) موجب افزایش کارایی واکسن ها گردند. این مطالعه با هدف استخراج و کلونینگ ژن اینترلوکین-2 جوجه پرورشی انجام گرفت. مواد و روش ها: در ابتدا برای جداسازی chil-2، rna تام به وسیله کشت سلول های طحال جوجه و با استفاده از فرآیند trizol جداسازی گردید. با استفاده از تکنیک تک مرحله ای rt-pcr و پرایمرهای طراحی شده، mrna به dna تبدیل و تکثیر شد. سپس محصول pcr در وکتور ptz57r/t از کیت ta-cloning وارد و توسط شوک حرارتی به باکتری اشریشیا کلی top10، منتقل گردید. یافته ها:  نتیجه rt-pcr نشان دهنده حضور یک باند bp 668 بود. درستی انجام فرآیند کلون سازی ژن در باکتری میزبان، از طریق واکنش هضم آنزیمی توسط آنزیم های برش دهنده hindiii و ecori و سپس انجام pcr از کلنی های مورد نظر و تعیین توالی ژن بدست آمده اثبات گردید. نتیجه گیری: در این پژوهش برای اولین بار در ایران، ژن chil-2 جداسازی و در باکتری کلون شد و تعیین توالی و بررسی آن در سایت ncbi نیز نشان دهنده شباهت 99% آن با توالی سایر ژن های chil-2 جداسازی شده در مطالعات مختلف بود.